淀粉磷酸化酶(SP)测试盒

品牌	其他品牌	货号	RQ-T27902
规格	100管/96样	供货周期	现货
主要用途	科研试验	品牌	瑞清
方法	微量法	售后	专属服务
可售地	全国	保存条件	低温保存

淀粉磷酸化酶(SP)测试盒

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测定意义：
淀粉磷酸化酶（Starch Phosphorylase，SP）是淀粉代谢过程可逆反应酶，既可催化淀粉的合成，也可催化淀粉的分解。
在高等植物中，淀粉磷酸化酶（合成方向）主要存在于质体中，负责延长淀粉的 α-1,4- 葡萄糖链的非还原末端；淀粉磷酸化酶（分解方向）主要存在于细胞质基质中，催化淀粉中的 α-1,4-糖苷键磷酸解产生葡萄糖-1-磷酸，负责葡萄糖链的磷酸解，是淀粉代谢过程中的关键酶。
在植物体中，淀粉磷酸化酶分解方向的底物无机磷浓度比合成方向的底物葡萄糖-1-磷酸浓度几乎高了两个数量级，一般认为淀粉磷酸化酶只催化淀粉的分解，因此，分解方向的淀粉磷酸化酶具有重要测定意义。

操作流程：

1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2. 设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3. 样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。

4. 除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7. 每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

优点如下:

1、快速简便:操作时间短,48-50T,可测40例样本左右,96-100T,可测80例样本左右;

2、取样量微:常规操作取样量50l, 酶标仪操作仅需5l即可检测,部分试剂盒取样多少请;

3、稳定性好:试剂盒2~8℃存放3个月有效;

4、再现性好:20倍稀释线性仍然良好;

5、回收试验: X =99%;

6、受外界影响因素小:干扰因素少,重复性强;

7、测试面广:可测动物血清(浆)、组织、各种体液、灌流液、各种培养细胞以及细胞培养上清液等,部分试剂盒适用于检测植物,欢迎

仪器:

1、分光光度计/酶标仪/生化分析仪(比色测定波长为550nm)

2、恒温水浴箱或气浴箱 (孵育温度为37℃)

3、台式离心机

4、漩涡混匀器

5、微量移液器

使用须知:

(1)请参照相关法规、文献、MSDs等信息,理解并掌握好试剂的特性,再进行安全操作。

(2)通常购买试剂时一定要想到--次性用完。若估算不足有剩余的话，更加注意其他保管和管理。

(3)万一-试剂操作者并非专业技术人员。必须在专业人士的指导监督下进行操作。对于使用后的废弃物,不要或者旧的试剂，应按照相关法律法规正当处理。

(4)购买后，请务必确认标签上的注意事项;做好预防颠倒,摔坏的措施和管理体制;在使用前再次确认标签上的注意事项，做好必要的安全对策;对没有标明其危害特性、有害特性的，也要慎重地进行操作;必须带好防护用具，小心翼翼进行操作。

生化试剂的种类与等级说明:

(1)免疫试剂包括抗体及抗血清、正常血清及补体、抗原、免疫组织化学研究用试剂、细胞培养用试剂、细胞分离试剂、凝胶内扩散法及电泳试剂等。

(2)基因工程用试剂包括基因表达与基因重组、人工合成蛋白、激素、核酸合成试剂、内切酶等。

(3)诱变剂和主要供测定工作场所与生活环境中的毒物质的致癌性与化学毒物的致突变性。

(4)工业用化学品包括试制开发的工业用化学品,有四千种以上,还在不断增加。

样本收集与前处理:

血清(浆)可直接测定。

红细胞:需按照试剂盒中说明书上红细胞的测定方法进行提取后测定。

动物组织样本:可用生理盐水按重量体积比制备成组织匀浆液,离心取上清测定。

培养细胞、细菌、植物组织:常用PBS作为匀浆介质破碎后离心取上清测定。

具体的样本前处理:参考我们随货发送的《实验方法学》以及试剂盒中详细说明书。

实验结果判断我有妙招:

1、定量测定结果根据标准曲线计算样品中待测物的含量。

2、以样品孔的OD值大于阴性对照OD值+2~3SD,作为阳性结果的阈值。

3、以P/N值(阳性孔OD值/阴性孔OD值)大于或等于2.1为阳性,P/N值小于2.1,但大于1.5为可疑,P/N小于1.5为阴性。

4、ELISA试剂盒目测定性法:加入底物经酶解和终止反应后,肉眼观察阳性孔颜色明显深于(竞争法则浅于)阴性对照,与阴性对照的颜色接近者,判定为阴性。

为了达到准确的实验结果,取用试剂时应遵守以下规则,以保证试剂不受污染和不变质:

(1)试剂不能与手接触。

(2)要用洁净的药勺,量筒或滴管取用试剂,*不准用同一种工具同时连续取用多种试剂。取完一种试剂后,应将工具洗净(药勺要擦干)后,方可取用另一种试剂。

(3)试剂取用后一定要将瓶塞盖紧,不可放错瓶盖和滴管,绝不允许张冠李戴,用完后将瓶放回原处。

(4)已取出的试剂不能再放回原试剂瓶内。

另外取用试剂时应本着节约精神,尽可能少用,这样既便于操作和仔细观察现象,又能得到较好的实验结果。

淀粉磷酸化酶(SP)测试盒